超微量分光光度計(jì)通過(guò)優(yōu)化光路設(shè)計(jì)與創(chuàng)新檢測(cè)原理,實(shí)現(xiàn)了對(duì)微升級(jí)別生物樣本的高精度分析,其核心機(jī)制可歸納為以下方面:
一、光路設(shè)計(jì):突破傳統(tǒng),實(shí)現(xiàn)微量檢測(cè)
液柱光程固定技術(shù)
利用液體表面張力,在上下檢測(cè)板間形成固定厚度液柱(如0.05mm或0.2mm)替代傳統(tǒng)比色皿。液柱高度作為光程,確保光路穩(wěn)定,同時(shí)避免因光徑不一致導(dǎo)致的誤差。部分機(jī)型采用可變光程技術(shù)(如0.02-1mm動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)),通過(guò)實(shí)時(shí)吸光度數(shù)據(jù)自動(dòng)調(diào)整光程,擴(kuò)展檢測(cè)濃度范圍。
四光程檢測(cè)設(shè)計(jì)
采用四光程檢測(cè)方式,提升檢測(cè)穩(wěn)定性、重復(fù)性和線性。相較于傳統(tǒng)單光程或雙光程系統(tǒng),四光程設(shè)計(jì)能夠提供更大范圍的檢測(cè)量程,并確保測(cè)量結(jié)果的一致性和準(zhǔn)確性。
光纖樣本拉伸技術(shù)
部分機(jī)型通過(guò)光纖樣本拉伸設(shè)計(jì),利用液體表面張力形成1mm固定光程薄膜,無(wú)需傳統(tǒng)耗材比色皿。光纖采用石英材質(zhì),表面精細(xì)拋光,不附著液體,只需濾紙擦拭即可去除殘留,同時(shí)光纖封套采用316L不銹鋼,抗腐蝕性強(qiáng),適用于復(fù)雜生物樣品。
二、檢測(cè)原理:基于朗伯-比爾定律的高精度分析
朗伯-比爾定律應(yīng)用
該定律指出,吸光度(A)與樣品濃度(C)和光程長(zhǎng)度(L)成正比,公式為
A=ε⋅C⋅L,其中ε
為摩爾吸光系數(shù)。超微量分光光度計(jì)通過(guò)測(cè)量特定波長(zhǎng)下的吸光度,結(jié)合已知的摩爾吸光系數(shù),計(jì)算出樣品濃度。
多波長(zhǎng)同步檢測(cè)
支持全光譜掃描(190-850nm),可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)波長(zhǎng)(如260nm核酸、280nm蛋白質(zhì)、230nm鹽離子),通過(guò)多參數(shù)分析評(píng)估樣品純度與濃度。例如,A260/A280比值用于判斷核酸純度,高純度DNA比值應(yīng)在1.8-2.0之間。
高靈敏度檢測(cè)系統(tǒng)
配備高穩(wěn)定性光源(如脈沖氙燈或LED),壽命長(zhǎng)達(dá)5000小時(shí)以上,減少預(yù)熱時(shí)間與光強(qiáng)波動(dòng)。檢測(cè)器采用紫外增強(qiáng)型CCD或硅光電池,響應(yīng)線性范圍廣,可捕捉微弱信號(hào)(如0.5pg/μLdsDNA),同時(shí)避免飽和效應(yīng)。